【使用方法】

1. 标本RNA提取：
可使用商业化试剂盒提取RNA''提取的RNA于-20℃以下保存，长期保存最好于-70℃条件下保存。
2. 反应液的配置：

1)先将试剂解冻，从试剂盒中取出相应的试剂，反应液在室温融化后，瞬时离心，按n+1配置25μl反应体系（n=样本数+1管阳性对照+1管阴性对照）

2）将上述反应液混匀离心后，按照每管20μL分装于各荧光PCR仪适用的PCR管中。
3）加样：将提取好的样本RNA，分别加入上述分装好的PCR反应管中，模板量可根据样本情况自行决定（临床标本通常使用5ul模板量），不够部分以水补足。总反应体积25μL。
3.荧光RT-PCR循环条件设置
程序
循环数
温度
反应时间
1
1
42℃
30min
2
1
95℃
2min
3
40
95℃
10sec
60℃
35sec
荧光检测模式为FAM荧光
4.对照设置
（1）阴性对照：核酸提取时以灭菌双蒸水代替标本。
（2）阳性对照：阳性核酸作为模板RNA
5.结果分析条件设定和结果判断
阈值设定原则以阈值线刚好超过正常阴性对照扩增曲线的最高点，结果显示阴性为准，或可根据仪器噪音情况进行调整。
Ct值无数值的标本为阴性样本
Ct值≤35.0的样本为阳性
Ct值≥35.0的样本建议重做。重做结果无数值者为阴性，否则为阳性。

【注意事项】

1. 实验前请仔细阅读本试剂盒说明书，严格按操作步骤执行。
2. 整个实验操作过程以及PCR实验室的软硬件设施应符合卫生部颁布《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》、《临床基因扩增检验实验室工作规范》等法规的要求。

本页面信息仅供参考，请以产品实际附带说明书为准。